Ki jan sa yo endonuceleases kanpe deyò
Konbyen ou konnen sou anzim restriksyon? Jwenn yon pi bon konpreyansyon de sa yo fè ak poukisa yo ap enpòtan, ak revizyon sa a.
Defini anzim Restriksyon
Endonucleases restriksyon yo se yon klas nan anzim ki koupe molekil ADN. Chak anzim rekonèt yon sekans inik nan nucleotid nan strand ADN la. Sekans sa yo anjeneral sou 4 a 6 baz-pè long. Sekans yo se palindromic nan ki Strange ADN nan konplemantè gen sekans lan menm sèlman nan direksyon an ranvèse.
Nan lòt mo, tou de kou ADN yo koupe nan menm kote a.
Ki kote sa yo anzim yo jwenn
Enzymes restriksyon yo jwenn nan anpil tansyon diferan nan bakteri kote wòl byolojik yo se yo patisipe nan defans selil. Sa yo anzim yo "mete restriksyon" etranje (egzanp viral) ADN ki antre nan selil la, pa detwi li. Selil lame a gen yon sistèm restriksyon-modifikasyon ki metilize ADN pwòp li yo nan sit espesifik pou anzim restriksyon li yo, kidonk pwoteje li nan klivaj. Plis pase 800 anzim li te ye yo te dekouvri ki rekonèt plis pase 100 sekans nikleotid diferan.
Sèvi ak nan biotechnologie
Anzymi Restriksyon yo te itilize nan biotechnologie nan koupe ADN nan pi piti strand yo nan lòd yo etidye diferans longueur fragman nan mitan moun (Restriksyon Fragman Length Polymorphism - RFLP). Yo menm tou yo itilize pou klonaj jèn.
Teknik RFLP yo te itilize pou detèmine ke moun oswa gwoup moun gen diferans diferan nan sekans jèn ak modèl klavaj restriksyon nan kèk zòn nan genomic la.
Konesans nan zòn sa yo inik se baz pou anprent dijital ADN . Chak nan metòd sa yo depann sou itilize nan elektwoforèz jar agaroz pou separasyon fragman yo ADN. TBE tanpon, ki te fòme nan baz Tris, asid borik, ak EDTA, souvan itilize pou elèktroforèz agaroz pou egzamine pwodwi ADN.
Kalite Enzymes Restriksyon
Gen twa diferan kalite anzim restriksyon. Kalite mwen koupe ADN nan kote o aza osi lwen ke 1000 oswa plis baz-pè soti nan sit la rekonesans. Kalite III koupe nan apeprè 25 baz-pè soti nan sit la. Kalite I ak III mande pou ATP epi yo ka gwo anzim ak miltip sub-inite yo. Kalite II anzim, ki se majorite yo itilize nan biotechnologie, koupe ADN nan sekans rekonèt la san yo pa bezwen pou ATP epi yo pi piti ak pi senp.
Kalite II anzim restriksyon yo rele dapre espès bakteri kote yo izole. Pa egzanp, EcoRI anzim te izole nan E. coli . Pifò nan piblik la abitye ak E. coli epidemi nan manje.
Tip II anzim restriksyon yo ka jenere de diferan kalite koupe depann sou si yo koupe tou de strand nan sant la nan sekans rekonesans an oswa chak strand pi pre yon fen nan sekans rekonesans an.
Ansyen koupe a pral jenere "fini kansè" ki pa gen okenn atachman nukleotid. Lèt la jenere "kolan" oswa "limenm" fini paske chak fragman ADN ki gen yon surang ki konpliman fragman yo ak lòt. Tou de yo itil nan jenetik molekilè pou fè ADN ak pwoteyin recombinant .
Fòm ADN sa a vle di paske li ligasyon (lye ansanm) ki pwodui nan de (2) oswa plis diferan seksyon ki pa te orijinal lye ansanm.