Se tanpon sa a itilize pou separasyon elektwoforèz ADN
TBE tanbou se patikilyèman itil pou separasyon fragman ki pi piti ADN (MW <1000), tankou pwodwi ti nan dijesyon anzim restriksyon .
TBE gen yon pi gwo kapasite tampon epi li pral bay nèt rezolisyon pase tanpon TAE . Tape tanp se yon solisyon ki fèt ak baz tris, asid acetic ak EDTA (tris-acetate-EDTA).
TBE se jeneralman pi chè pase TAE ak inibit ligaz ADN, ki ka lakòz pwoblèm si yo ta fèt pou pirifye ADN ak etap ligasyon yo. Avèk twa etap senp ki swiv yo, aprann kouman pou fè TBE tanpon. Li pa ta dwe pran plis pase apeprè 30 minit pou kreye tanpon sa a. Men ki jan:
Prepare yon Solisyon Stock nan EDTA
Yon EDTA (ethylendiamine asid tetraosetik) solisyon yo ta dwe prepare davans nan tan. EDTA pa pral ale konplètman nan solisyon jiskaske pH la ajiste apeprè 8.0. Pou yon solisyon stock 500 mililit nan 0.5 M EDTA, peze soti 93,05 gram nan sèl dinasti EDTA (FW = 372.2). Lè sa a, fonn li nan 400 mililitèr dlo deionised ak ajiste pH la ak NaOH. Apre sa, tèt moute solisyon an nan yon volim final la nan 500 mililit.
Prepare yon Solisyon Stock nan TBE
Fè yon solisyon konsantre (5x) nan TBE pa peze 54 g Tris baz (FW = 121,14) ak 27.5 g asid borik (FW = 61.83) ak dissolve tou de nan apeprè 900 mililit nan dlo deionised. Lè sa a, ajoute 20 mililit nan 0.5 M EDTA (pH 8.0) ak ajiste solisyon an nan yon volim final nan 1 lit.
Sa a kapab solisyon dwe estoke nan tanperati chanm, men yon presipite ap fòme nan pi gran solisyon yo. Sere pezib la nan boutèy an vè epi jete si gen yon presipitit ki fòme.
Prepare yon Solisyon Travay nan TBE
Pou elektwoforèz jèl agaroz, yon tanpon TBE ka itilize nan yon konsantrasyon nan 0.5x (1:10 dilution nan stock la konsantre). Delye solisyon an stock pa 10x nan dlo deionised. Final konsantrasyon solid yo se 45 mM Tris-borat ak 1 mM EDTA. Tanpon la se kounye a pare pou itilize nan kouri yon jèl agaroz .
Kisa ou bezwen
Pou fè TBE tanpon, ou pral bezwen jis kat sibstans. Atik ki rete yo nan lis sa a se ekipman. Sibstans ki sou kat yo egzije yo se EDTA sismatri sèl, Tris baz, asid borik ak dlo deionised.
Kòm pou ekipman, ou pral bezwen yon pH mèt ak estanda kalibrasyon, jan sa apwopriye. Anplis de sa, ou pral bezwen 600-mililitèr ak 1500-mililitatè baton oswa flasks. Awondi soti bezwen ekipman ou yo gradye silenn ak brase fèy ak plak brase.
Tcheke envantè a nan laboratwa ou pral itilize pou asire ou gen tout bagay ou bezwen anvan ou kòmanse. Pa gen anyen ki pi mal pase gen sispann nan mitan an nan prepare yon solisyon paske ou te kouri soti nan materyèl sa yo apwopriye.
Si laboratwa ou an nan lekòl la oswa nan sit travay ou a, tcheke avèk pèsonèl la apwopriye yo wè yo ke yo gen tout atik yo nan stock la. Fè sa ka sove ou tan ak enèji nan fen a.