Gene klonaj se zak la nan fè kopi, oswa klon, nan yon jèn sèl. Yon fwa yo idantifye yon jèn, klon yo ka itilize nan plizyè domèn rechèch byomedikal ak endistriyèl. Jenetik jenetik se pwosesis la nan klonaj jèn nan òganis nouvo oswa chanje sekans ADN la pou chanje pwodwi pwoteyin. Jenetik jenetik depann sou kapasite nou yo fè pwosedi sa yo esansyèl.
01 Reyaksyon Polymerase Chain
02 Enzymes Restriksyon
Dekouvèt la nan anzim li te ye kòm endonucleases restriksyon te esansyèl nan jeni pwoteyin . Anzim sa yo koupe ADN nan lokal espesifik ki baze sou sekans nukleotid la. Dè santèn de anzim restriksyon diferan, ki kapab koupe ADN nan yon sit distenk, yo te izole nan anpil tansyon diferan nan bakteri. ADN koupe ak yon anzim restriksyon pwodui anpil fragman ki pi piti, diferan gwosè. Sa yo ka separe lè l sèvi avèk elektwoforèz jèl oswa chromatografi.
03 Electrophoresis
Pou pirifye ADN ki soti nan yon kilti selil, oswa koupe li lè l sèvi avèk anzim restriksyon yo pa ta dwe nan anpil itilize si nou pa t 'kapab visualized ADN la - ki se, jwenn yon fason yo wè si wi ou non ekstrè ou gen anyen, oswa ki sa fragman gwosè ou ou koupe l 'nan. Youn nan fason pou fè sa se pa elektwoforèz jèl. Jèl yo te itilize pou yon varyete de rezon, soti nan gade koupe ADN pou detekte ensistans ADN ak knockouts.
04 Antre nan de moso ADN
Nan rechèch jenetik, li souvan nesesè pou konekte de oswa plis strand endividyèl nan ADN, pou kreye yon strè rekombinan, oswa fèmen yon strand sikilè ki te koupe ak anzim restriksyon. Anzim rele lig ADN ka kreye bon kovalan ant chenn nikleotid. Enzymes ADN polymerase I a ak polynucleotide kinase yo enpòtan tou nan pwosesis sa a, pou ranpli twou vid ki genyen yo oswa fosforylating 5 'fini, respektivman.
05 Seleksyon ADN ti repouse
Ti moso sikilè nan ADN ki pa fè pati nan yon genomik bakteri, men yo kapab nan tèt-replikasyon, yo konnen kòm plasmid. Plasmid yo souvan itilize kòm vektè pou transpòte jèn ant mikwo-òganis yo. Nan biotechnologie, yon fwa jèn nan enterè yo te anplifye e tou de jèn a ak plasmid yo koupe pa anzim restriksyon, yo ligated ansanm jenere sa yo rele kòm yon ADN rekombinan. Viral (bakteriofaj) ADN kapab itilize tou kòm yon vektè, kòm ka kosmid, plasmid recombinant ki gen jèn bakteriofaj.
06 Metòd pou avanse pou yon vektè nan yon selil lame
Pwosesis la nan transfere materyèl jenetik sou yon vektè tankou yon plasmid, nan nouvo selil lame, yo rele transfòmasyon. Teknik sa a egzije pou selil lame yo ekspoze a yon chanjman nan anviwònman an ki fè yo "konpetan" oswa tanporè pèmeyab nan vektè a. Elektwòporasyon se youn teknik sa yo. Pi gwo plasmid la, pi ba a efikasite ak ki li te pran moute pa selil yo. Pi gwo segman ADN yo pi fasil klone avèk bakteriofaj, retrovirus oswa lòt vektè viral oswa kosmid nan yon metòd ki rele transduction. Phage oswa viral vektè yo souvan yo itilize nan medikaman rejeneratif men ka lakòz ensèsyon ADN nan pati nan kwomozòm nou kote nou pa vle li, sa ki lakòz konplikasyon e menm kansè.
07 Metòd pou chwazi òganis transjenik
Se pa tout selil ki pral pran ADN pandan transfòmasyon. Li esansyèl ke gen yon metòd pou detekte sa yo ki fè. Anjeneral, plasmid yo pote jèn pou rezistans antibyotik ak selil transjenik yo ka chwazi ki baze sou ekspresyon de jèn sa yo ak kapasite yo pou yo grandi sou medya ki genyen antibyotik la. Metòd altènatif nan seleksyon depann de prezans lòt pwoteyin repòtè tankou sistèm x-gal / lacZ , oswa vèt fluoresans pwoteyin, ki pèmèt seleksyon ki baze sou koulè ak fluoresans, respektivman.